Slanje vašeg dobrog rada u bazu znanja je jednostavno. Koristite obrazac ispod

Studenti, postdiplomci, mladi naučnici koji koriste bazu znanja u svom studiranju i radu biće vam veoma zahvalni.

BELORUSKI DRŽAVNI UNIVERZITET

Biološki fakultet

ANTITELA, KLASIFIKACIJA I FUNKCIJE

Abstract

Student 4. godine, 6. grupa

KOVALCHUK K.V.

Minsk 2004

Otkriće antitela

Struktura antitijela

Klasifikacija antitijela

Funkcije antitijela

Književnost

Otkriće antitela

Termin "antitelo" skovan je krajem 19. veka. Godine 1890. Behring i Kitasato su izveli eksperimente u kojima su proučavali efekte toksina difterije i tetanusa na zamorce. Životinjama su ubrizgali subletalnu dozu toksina, nakon nekog vremena su im uzeli serum i ubrizgali ga zajedno sa smrtonosnom dozom toksina u druge životinje, zbog čega životinje nisu uginule. Zaključeno je da se nakon imunizacije toksinom u krvi životinja pojavljuje supstanca koja je može neutralizirati i time spriječiti bolest. Ova supstanca je nazvana antitoksin, a zatim je uveden opštiji termin - antitelo; Supstance koje izazivaju stvaranje antitela nazivaju se antigeni.

Tek 1939. Tiselius i Kabat su pokazali da su antitijela sadržana u specifičnoj frakciji serumskih proteina. Oni su imunizirali životinju sa ovalbuminom i uzeli su dva uzorka iz rezultirajućeg seruma u jedan od njih i nastali precipitat (kompleks antitijela-ovalbumin) je uklonjen. Elektroforeza je pokazala da je u uzorku u koji je dodan ovalbumin sadržaj g-globulina bio značajno manji nego u drugom uzorku. Ovo je ukazivalo da su antitijela bila g-globulini. Kako bi se razlikovali od ostalih proteina sadržanih u ovoj frakciji globulina, antitijela su nazvana imunoglobulinima. Sada je poznato da se antitela takođe nalaze u značajnim količinama u frakcijama β- i β-globulina.

Struktura antitijela utvrđena je nizom eksperimenata. U osnovi, oni su se sastojali u tome da su antitijela tretirana proteolitičkim enzimima (papain, pepsin), te su podvrgnuta alkilaciji i redukciji merkaptoetanolom. Zatim su proučavana svojstva nastalih fragmenata: određena je njihova molekularna masa (hromatografijom), kvarterna struktura (rendgenskom difrakcijom), sposobnost vezivanja za antigen itd. Antitela na ove fragmente su takođe korišćena da bi se utvrdilo da li se antitela na jedan tip fragmenta mogu vezati za fragmente drugog tipa. Na osnovu dobijenih podataka konstruisan je dole opisani model molekula antitijela.

Struktura antitijela

Molekul antitijela sastoji se od četiri polipeptidna lanca (slika 1): dva teška (H; molekulska težina 50-70 kDa) i dva laka (L; molekulska težina 23 kDa). Lanci su povezani nekovalentnim vezama (vodonik, hidrofobne veze) i disulfidnim mostovima i sastoje se od dva (laki lanac) ili četiri (teški lanac) domena dužine oko 110 aminokiselinskih ostataka. VH i VL varijabilni domeni, koji su N-terminalni dijelovi lanaca, formiraju mjesto vezanja antigena. Pored njih, laki lanci sadrže jedan (CL), a teški lanci tri ili četiri (CH1-4) konstantna domena.

Kada se antitela enzimski digestiraju proteolitičkim enzimom papainom, formiraju se tri fragmenta: dva identična fragmenta koji se vezuju za antigen (Fab) i jedan fragment koji se može kristalizovati (Fc). Fab fragment se sastoji od intaktnog L lanca povezanog disulfidnom vezom za CH1 i VH domene, njegov N-terminalni dio (Fv fragment) ima aktivnost vezanja antigena. Fc fragment se sastoji od dva para CH2 i CH3 domena povezanih disulfidnom vezom. Ovaj fragment nije uključen u vezivanje antigena, ali obavlja efektorske funkcije - reagirajući sa stanicama i faktorima komplementa.

Sposobnost antitijela da se veže za određeni antigen određena je sastavom aminokiselina varijabilnih domena, odnosno njihovih hipervarijabilnih regija. Ove regije karakterizira vrlo velika varijabilnost sekvence aminokiselina. Svaki VH i VL domen sadrži tri hipervarijabilne regije, koje zapravo formiraju mjesta za vezivanje antigena. Sekvence između njih nazivaju se sekvencama okvira; karakteriše ih niža strukturna varijabilnost.

Rice. 1. Struktura molekula antitijela. H i L, teški i laki lanci; CDR, hipervarijabilne regije.

Aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona neznatno varira. Sekvenciranjem lakih lanaca otkriveno je postojanje dve glavne varijante aminokiselinskih sekvenci CL domena, što je dovelo do identifikacije dva tipa lakih lanaca - kapa (k) i lambda (l). Molekul antitijela može istovremeno sadržavati ili dva k-lanca ili dva l-lanca (k-lanci su češći u ljudskim antitijelima).

Takođe, određivanje sekvenci aminokiselina omogućilo je identifikaciju pet tipova CH regiona i, shodno tome, teških lanaca (b, e, f, d, l). Lanci m i e sadrže četiri konstantna domena, preostali lanci sadrže tri konstantna domena, kao i zglobni region između CH1 i CH2 domena. U zavisnosti od toga koji tip teškog lanca antitijelo sadrži, razlikuje se pet klasa imunoglobulina: IgA (teški lanac tipa b), IgD (e), IgE (e), IgG (g), IgM (m). Zbog nekih razlika u sekvencama aminokiselina, razlikuje se nekoliko tipova l-lanaca, kao i nekoliko tipova b- i g-lanaca (i, shodno tome, nekoliko podklasa IgG i IgA). Povezano sa teškim lancima (prvenstveno CH2 domenima) je nekoliko oligosaharidnih lanaca koji verovatno povećavaju rastvorljivost antitela i uključeni su u vezivanje za komponente komplementa i ćelijske receptore.

U domenima, polipeptidni lanci su naslagani tako da formiraju B-presavijene slojeve u kojima su antiparalelni lanci povezani petljama (slika 2). Ove petlje mogu imati različite dužine i sekvence aminokiselina, što je veoma važno jer formiraju mjesto vezanja antigena. Unutar svakog domena, dva β-lista su povezana disulfidnom vezom i stabilizirana hidrofobnim interakcijama. Kvartarna struktura u obliku slova Y (slika 3) nastaje zbog nekovalentnih interakcija između domena. Između CH2 domena nalaze se molekuli ugljikohidrata, što uzrokuje da ovi domeni strše i čine ih pristupačnijim za interakciju s različitim molekulima, kao što su komponente sistema komplementa.

Fig.2. Dvodimenzionalni dijagram savijanja polipeptidnog lanca unutar VL domena: dva β-naborana sloja povezana disulfidnom vezom (crna traka).

Fig.3. Dijagram koji prikazuje interakciju između domena lakog i teškog lanca. Između CH2 domena su prikazani molekuli ugljikohidrata (CDR).

Klasifikacija antitijela

Kao što je već spomenuto, ovisno o vrsti teškog lanca, razlikuje se pet klasa imunoglobulina.

IgGčine većinu serumskih antitijela. Većina antitela sekundarnog imunog odgovora i antitoksina predstavljaju imunoglobulini klase G IgG majke obezbeđuju pasivni imunitet deteta u prvih nekoliko meseci života, ulazeći u krv fetusa kroz placentu. IgG aktivira sistem komplementa i vezuje se za antigene na površini ćelije, čineći te ćelije dostupnijim za fagocitozu (opsonizaciju). Sposoban da se veže za tkiva izazivajući anafilaktičke reakcije.

IgM molekule sastoji se od pet identičnih četverolančanih podjedinica povezanih disulfidnim vezama. Oni također sadrže dodatni polipeptidni lanac (J-lanac), koji formira domenu tipa imunoglobulina i vezan je disulfidnim vezama za C-terminalne peptide (18 aminokiselinskih ostataka) teških lanaca pojedinačnih monomera uključeni u polimerizaciju monomera. Imunoglobulini klase M nalaze se pretežno u krvi. Dominiraju kao "rana" antitela (prva se pojavljuju tokom razvoja imunog odgovora). Zbog višestrukih mjesta vezivanja, uzrokuju aglutinaciju stanica. Efikasniji od IgG u aktivaciji komplementa.

IgA dominiraju među antitijelima serozno-mukoznih sekreta (slina, kolostrum, mlijeko, sekreti respiratornog trakta), gdje su zastupljena uglavnom u dimernom obliku. Kao IgM, oni sadrže C-terminalni peptid na koji se može vezati J lanac, povezujući dva monomera u dimer. Za ovaj kompleks se dodatno vezuje protein koji se naziva sekretorna komponenta, što pospješuje isporuku antitijela na sekrete i štiti ih od proteolize. U ljudskom serumu prisutni su uglavnom u monomernom obliku, au serumu drugih sisara uglavnom su u dimernom obliku. Sprječava prodiranje virusa i mikroorganizama kroz sluznicu.

IgD I IgE prisutan u serumu u vrlo niskim koncentracijama. IgD se često nalaze na citoplazmatskim membranama B ćelija i smatra se da su uključeni u antigen zavisnu diferencijaciju limfocita. IgE se nalazi na membranama bazofila i mastocita. Oni sudjeluju u alergijskim reakcijama, uzrokujući da IgE nositeljska stanica luči histamin i druge vazoaktivne supstance kao odgovor na vezivanje IgE molekula za antigen. Možda igraju značajnu ulogu u anthelmintskom imunitetu.

Funkcije antitijela

Antitijela sintetiziraju B limfociti i iz njih formirane plazma stanice. Njihovi molekuli su ugrađeni u citoplazmatsku membranu B limfocita, gdje funkcionišu kao antigen-specifični receptori. Većina B limfocita ljudske krvi izražava dvije klase imunoglobulina na svojoj površini - IgM i IgD. Ali u određenim dijelovima tijela, B ćelije koje nose druge klase antitijela (na primjer, IgA u crijevnoj sluznici) mogu se pojaviti na visokim frekvencijama. Plazma ćelije luče antitela u krvnu plazmu i tkivnu tečnost. Sva antitijela proizvedena od strane jedne B ćelije (ili plazma ćelije) imaju identično mjesto vezanja antigena i mogu se vezati samo za jedan antigen.

Primarna funkcija antitijela je da se vežu za strane (normalno) antigene uz njihovu naknadnu inaktivaciju. Antitijela su sposobna da inaktiviraju toksine vezujući se za područja molekule toksina odgovorna ili za adsorpciju na ćelijskim receptorima ili direktno za toksični učinak. Slično, vezivanje antitijela za proteine ​​neophodne za adsorpciju virusa na ćelijske receptore dovodi do inaktivacije viriona.

Pored toga, antitela su sposobna da uključe druge elemente imunog sistema u imuni odgovor: sistem komplementa i ćelije domaćina. Komponenta komplementa C1q je sposobna da se veže za konstantne domene teškog lanca antitela klasa G i M (sa CH2 i CH3 domenima, respektivno). To uzrokuje kaskadu reakcija (proces aktivacije komplementa na klasičnom putu), što na kraju dovodi do lize stanice za čije su antigene vezana antitijela. Neke tjelesne ćelije nose Fc receptore na svojoj površini, za koje se molekuli antitijela mogu vezati preko Fc fragmenta. Ovi receptori su prisutni u makrofagima, što im omogućava da prepoznaju komplekse antigen-antitijelo sa njihovom naknadnom fagocitozom (antitijela su opsonini, tj. molekuli koji, kada se vežu za antigene, olakšavaju njihovu fagocitozu). Fc fragment je također odgovoran za fiksiranje antitijela na stanice određenih tkiva i razvoj anafiloksičnih reakcija.

Antitijela u početku postoje za bilo koji antigen u tijelu životinje. To sugerira da svaki organizam proizvodi milijune različitih imunoglobulina, koji se razlikuju po mjestima vezanja antigena. Ovu raznolikost osigurava nekoliko mehanizama. Laki i teški lanci molekula antitijela su kodirani sa nekoliko tipova genskih segmenata: laki lanac - sa tri tipa segmenata (V, J, C), teški lanac - sa četiri (V, D, J, C). Genom obično sadrži od nekoliko do nekoliko stotina segmenata svakog tipa, malo različitih u nukleotidnoj sekvenci. Da bi se sintetizirao cijeli polipeptid (laki ili teški lanac), potrebno je kombinirati nukleotidne sekvence segmenata svakog tipa. Ova asocijacija se javlja prvo na nivou DNK (somatska rekombinacija), a zatim na nivou glasničke RNK (splicing). Kao rezultat toga, formira se ogroman broj varijanti mRNA i, shodno tome, polipeptidnih lanaca. Tokom somatske rekombinacije i spajanja mogu se pojaviti insercije i delecije nukleotida, što, zajedno sa povećanom učestalošću mutacija gena antitijela, dodatno povećava raznolikost ovih jedinstvenih proteina.

Književnost

1. Imunologija / Royt A., Brostoff J., Mail D.-M.: Mir, 2000.-592 str.

2. Imunologija: U 3 toma; v.1 / Ed. U. Pola.-M.: Mir, 1987-88.-476 str.

Slični dokumenti

Priroda antitijela, njihove glavne funkcije i struktura. Molekularna struktura antitijela. Strukturne i funkcionalne karakteristike imunoglobulina različitih klasa. Mehanizam interakcije između antitijela i antigena. Teorije raznolikosti antitijela, njihova ključna svojstva.

sažetak, dodan 22.05.2015


Karakteristike imunološkog sistema, njegova struktura, namjena i funkcije glavnih organa. Mehanizam imunološke odbrane, proizvodnja antitijela, glavne klase imunoglobulina. Karakteristike posljedica nedostatka vitamina, njihov značaj za ljudski organizam.

sažetak, dodan 04.06.2010


Tehnologiju za proizvodnju specijalnih antitela koja pomažu imunološkom sistemu da otkrije tumorske ćelije i da ih se reši, razvili su 1975. G. Kohler i G. Milstein. Monoklonska antitijela u liječenju raka, mehanizam djelovanja.

prezentacija, dodano 04.10.2016


Proizvodnja antiidiotipskih i monoklonskih antitijela od ovaca fuzijom stanica među vrstama. Područja primjene monoklonskih antitijela i metode njihove proizvodnje. Upotreba vazdušnih fermentora za proizvodnju antitijela. Kontrolni sistem afinitetne hromatografije.

sažetak, dodan 06.08.2009


Metode proizvodnje polianilina, njegova struktura i elektrohemijska svojstva. Proučavanje uticaja uslova za dobijanje polianilina i merenja signala senzora na bazi elektrode modifikovane polianilinom na karakteristike detekcije antitela na DNK.

kurs, dodato 20.04.2017


Karakteristike imunološkog odbrambenog sistema organizma. Stečeni imunitet i njegovi oblici. Proizvodnja antitijela i regulacija njihove proizvodnje. Formiranje imunoloških memorijskih ćelija. Uzrasne karakteristike imuniteta, sekundarne (stečene) imunodeficijencije.

sažetak, dodan 04.11.2010


Imunogenost antigena je sposobnost u tijelu imunizirane životinje da formira antitijela. Koncept "stranosti" imunogena, njegova ovisnost o genetskim karakteristikama imunizirane životinje. Priprema specifičnih antiseruma.

sažetak, dodan 20.09.2009


Rizik od oštećenja ljudskog imunološkog sistema. Simptomi, prevencija i liječenje bolesti. Stanje pacijenta zaraženog HIV-om. Otkrivanje HIV infekcije testom krvi na prisustvo antitijela. Uticaj virusa na imuni sistem. AIDS i njegove faze.

sažetak, dodan 24.01.2012


Značenje i osnovni principi hibridomske tehnologije. Neke tehnike za jačanje imunološkog odgovora. Upotreba lijekova izvedenih od monoklonskih antitijela koja se vezuju samo za ćelijske antigene stanica raka (ReoPro).

kurs, dodato 20.05.2015


Razvoj metode za proizvodnju monoklonskih antitijela na bazi hibridomske tehnologije. Uloga hibridoma u fundamentalnoj imunologiji. Stvaranje imuniteta na osnovu teorije klonske selekcije. Metode dijagnostike bolesti i malignih tumora.

Postoji pet klasa antitijela (imunoglobulina) - IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, koja se razlikuju po strukturi i sastavu aminokiselina teških lanaca i efektorskih funkcija koje obavljaju.

Istorija studije

Prvo antitijelo otkrili su Behring i Kitazato 1890. godine, ali u to vrijeme se ništa definitivno nije moglo reći o prirodi otkrivenog antitoksina tetanusa, osim njegove specifičnosti i prisutnosti u serumu imune životinje. Tek 1937. godine, uz istraživanje Tiseliusa i Kabata, počelo je proučavanje molekularne prirode antitijela. Autori su koristili metodu elektroforeze proteina i pokazali povećanje frakcije gama globulina u krvnom serumu imuniziranih životinja. Adsorpcija seruma antigenom koji je uzet za imunizaciju smanjila je količinu proteina u ovoj frakciji na nivo intaktnih životinja.

Struktura antitijela

Antitijela su relativno veliki (~150 kDa - IgG) glikoproteini složene strukture. Sastoje se od dva identična teška lanca (H-lanci, koji se sastoje od V H, CH 1, šarke, CH 2- i CH 3-domena) i dva identična laka lanca (L-lanci, koji se sastoje od V L - i C L - domena) . Oligosaharidi su kovalentno vezani za teške lance. Koristeći papain proteazu, antitijela se mogu podijeliti na dvije Fab. vezivanje fragmenta antigena- fragment koji veže antigen) i jedan (eng. fragment koji se može kristalizovati- fragment sposoban za kristalizaciju). U zavisnosti od klase i funkcija koje se obavljaju, antitijela mogu postojati kako u monomernom obliku (IgG, IgD, IgE, serum IgA) tako iu oligomernom obliku (dimer-sekretorni IgA, pentamer - IgM). Ukupno postoji pet tipova teških lanaca (α-, γ-, δ-, ε- i μ-lanci) i dva tipa lakih lanaca (κ-lanac i λ-lanac).

Klasifikacija teških lanaca

Postoji pet razreda ( izotipovi) imunoglobulini, koji se razlikuju:

• sekvenca aminokiselina
• molekularne težine
• naplatiti

IgG klasa je klasifikovana u četiri podklase (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), klasa IgA u dve podklase (IgA1, IgA2). Sve klase i podklase čine devet izotipova koji su normalno prisutni kod svih pojedinaca. Svaki izotip je određen sekvencom aminokiselina konstantne regije teškog lanca.

Funkcije antitijela

Imunoglobulini svih izotipova su bifunkcionalni. To znači da imunoglobulin bilo koje vrste

• prepoznaje i vezuje antigen, a zatim
• pojačava uništavanje i/ili uklanjanje imunih kompleksa nastalih kao rezultat aktivacije efektorskih mehanizama.

Jedan region molekula antitela (Fab) određuje njegovu specifičnost antigena, a drugi (Fc) obavlja efektorske funkcije: vezuje se za receptore koji se eksprimiraju na ćelijama tela (na primer, fagociti); vezivanje za prvu komponentu (C1q) sistema komplementa kako bi se pokrenuo klasični put kaskade komplementa.

To znači da svaki limfocit sintetizira antitijela samo jedne specifične specifičnosti. A ova antitijela se nalaze na površini ovog limfocita kao receptori.

Kao što pokazuju eksperimenti, svi imunoglobulini na površini ćelije imaju isti idiotip: kada se rastvorljivi antigen, sličan polimerizovanom flagelinu, veže za određenu ćeliju, tada se svi imunoglobulini ćelijske površine vezuju za ovaj antigen i imaju istu specifičnost, tj. idiotip.

Antigen se vezuje za receptore, a zatim selektivno aktivira ćeliju da proizvodi velike količine antitijela. A budući da ćelija sintetizira antitijela samo jedne specifičnosti, ta specifičnost se mora podudarati sa specifičnošću početnog površinskog receptora.

Specifičnost interakcije antitela sa antigenima nije apsolutna, ona mogu u različitom stepenu da reaguju sa drugim antigenima. Antiserum podignut protiv jednog antigena može reagirati sa srodnim antigenom koji nosi jednu ili više istih ili sličnih determinanti. Stoga svako antitijelo može reagirati ne samo s antigenom koji je uzrokovao njegovo stvaranje, već i s drugim, ponekad potpuno nepovezanim molekulima. Specifičnost antitijela određena je aminokiselinskim slijedom njihovih varijabilnih regija.

Teorija klonske selekcije:

1. Antitijela i limfociti sa potrebnom specifičnošću već postoje u tijelu prije prvog kontakta sa antigenom.
2. Limfociti koji učestvuju u imunološkom odgovoru imaju receptore specifične za antigen na površini svoje membrane. B limfociti imaju receptorske molekule iste specifičnosti kao i antitijela koja limfociti naknadno proizvode i luče.
3. Svaki limfocit na svojoj površini nosi receptore samo jedne specifičnosti.
4. Limfociti koji imaju antigen prolaze kroz fazu proliferacije i formiraju veliki klon plazma ćelija. Plazma ćelije sintetiziraju antitijela samo one specifičnosti za koju je prekursorski limfocit programiran. Signali za proliferaciju su citokini, koje oslobađaju druge ćelije. Limfociti mogu sami lučiti citokine.

Varijabilnost antitijela

Antitijela su izuzetno varijabilna (u tijelu jedne osobe može postojati do 10 8 varijanti antitijela). Sva raznolikost antitijela proizlazi iz varijabilnosti i teških i lakih lanaca. Razlikuju se antitijela koja proizvodi jedan ili drugi organizam kao odgovor na određene antigene:

• Izotipski varijabilnost - manifestuje se u prisustvu klasa antitela (izotipova), koji se razlikuju po strukturi teških lanaca i oligomernosti, koje proizvode svi organizmi date vrste;
• Alotipski varijabilnost - manifestuje se na individualnom nivou unutar date vrste u obliku varijabilnosti alela imunoglobulina - genetski je određena razlika između datog organizma i drugog;
• Idiotipski varijabilnost - manifestuje se u razlikama u sastavu aminokiselina na mestu vezivanja antigena. Ovo se odnosi na varijabilne i hipervarijabilne domene teških i lakih lanaca koji su u direktnom kontaktu sa antigenom.

Kontrola proliferacije

Najefikasniji mehanizam kontrole je da proizvod reakcije istovremeno služi i kao njegov inhibitor. Ova vrsta negativne povratne sprege javlja se tokom formiranja antitijela. Efekat antitela se ne može objasniti jednostavno neutralizacijom antigena, jer celi IgG molekuli suzbijaju sintezu antitela mnogo efikasnije od F(ab")2 fragmenata. Pretpostavlja se da blokada produktivne faze T-zavisnih B- ćelijski odgovor nastaje kao rezultat formiranja unakrsnih veza između antigena, IgG i Fc receptora na površini B ćelija , pripisuje im se pojačavajuća uloga u ranoj fazi imunološkog odgovora.

Nije bilo veridbi i veridba Bolkonskog sa Natašom nikome nije objavljena; Princ Andrej je insistirao na tome. Rekao je da, budući da je on uzrok kašnjenja, mora snositi cijeli teret toga. Rekao je da je zauvek vezan za svoju reč, ali da nije želeo da vezuje Natašu i dao joj je potpunu slobodu. Ako posle šest meseci oseti da ga ne voli, biće u pravu ako ga odbije. Podrazumeva se da ni roditelji ni Nataša nisu želeli da čuju za to; ali princ Andrej je insistirao na svome. Princ Andrej je svaki dan posećivao Rostovove, ali se prema Nataši nije ponašao kao prema mladoženji: rekao joj je tebe i samo joj je poljubio ruku. Nakon dana prosidbe, uspostavljen je potpuno drugačiji, blizak, jednostavan odnos između princa Andreja i Nataše. Kao da se do sada nisu poznavali. I on i ona voleli su da se prisećaju kako su se gledali dok su još bili ništavilo, sada su se oboje osećali kao potpuno različita stvorenja: tada hinjeno, sada jednostavno i iskreno. U početku se porodica osećala nezgodno u ophođenju sa princom Andrejem; izgledao je kao čovek iz vanzemaljskog sveta, a Nataša je dugo navikavala svoju porodicu na princa Andreja i ponosno uveravala sve da se on samo čini tako posebnim, i da je isti kao i svi ostali, i da se ona ne boji njega i da niko ne treba da se plaši njegovog. Nakon nekoliko dana, porodica se navikla na njega i bez oklijevanja s njim vodila isti način života u kojem je i on učestvovao. Znao je razgovarati i o domaćinstvu s grofom, i o odjevnim kombinacijama s groficom i Natašom, i o albumima i platnu sa Sonjom. Ponekad je porodica Rostov, među sobom i pod knezom Andrejem, bila iznenađena kako se sve to dogodilo i koliko su očigledni predznaci toga: dolazak princa Andreja u Otradnoe i njihov dolazak u Sankt Peterburg, i sličnost između Nataše i Knez Andrej, koji je dadilja primetila prilikom njihove prve posete knezu Andreju, i sukob 1805. godine između Andreja i Nikolaja i mnoge druge predznake onoga što se dogodilo primetili su oni kod kuće.
Kuća je bila ispunjena onom poetskom dosadom i tišinom koja uvijek prati prisustvo mladenaca. Često sedeći zajedno, svi su ćutali. Ponekad su ustajali i odlazili, a mlada i mladoženja, ostajući sami, i dalje su ćutali. Rijetko su pričali o svojim budućim životima. Princ Andrej se uplašio i stidio da priča o tome. Nataša je delila ovaj osećaj, kao i sva njegova osećanja, koja je stalno nagađala. Jednom je Nataša počela da se raspituje za njegovog sina. Princ Andrej je pocrveneo, što mu se sada često dešavalo i što je Nataša posebno volela, i rekao da njegov sin neće živeti sa njima.
- Zašto? – uplašeno je rekla Nataša.
- Ne mogu da ga oduzmem svom dedi i onda...
- Kako bih ga volela! - reče Nataša, odmah pogodivši njegovu misao; ali znam da želiš da nema izgovora da kriviš tebe i mene.
Stari grof je ponekad prilazio princu Andreju, ljubio ga i pitao ga za savjet o odgoju Petje ili službi Nikole. Stara grofica je uzdahnula dok ih je pogledala. Sonya se u svakom trenutku plašila da će biti suvišna i pokušavala je da nađe izgovore da ih ostavi na miru kada im to nije potrebno. Kada je princ Andrej govorio (govorio je vrlo dobro), Nataša ga je slušala s ponosom; kada je progovorila, primetila je sa strahom i radošću da je on pažljivo i ispitujući gleda. Ona se zbunjeno pitala: „Šta on traži u meni? Svojim pogledom pokušava nešto postići! Šta ako nemam ono što on traži tim pogledom?” Ponekad je ulazila u svoje karakteristično ludo veselo raspoloženje, a tada je posebno volela da sluša i gleda kako se princ Andrej smeje. Rijetko se smijao, ali kada bi se smijao, potpuno se predavao njegovom smijehu, a svaki put nakon ovog smijeha ona mu je bila bliža. Nataša bi bila potpuno srećna da je nije uplašila pomisao na skoro i približavanje razdvajanja, jer je i on probledeo i ohladio se pri samoj pomisli na to.
Uoči odlaska iz Sankt Peterburga, princ Andrej je sa sobom doveo Pjera, koji od bala nikada nije bio u Rostovima. Pjer je djelovao zbunjeno i posramljeno. Razgovarao je sa svojom majkom. Natasha je sjela sa Sonjom za šahovski sto i tako pozvala princa Andreja k sebi. Prišao im je.
– Već dugo poznajete Bezuhoja, zar ne? upitao je. - Da li ga voliš?
- Da, fin je, ali veoma zabavan.
I ona je, kao i uvek govoreći o Pjeru, počela da priča viceve o njegovoj rasejanosti, šale koje su se čak i izmišljale o njemu.
„Znate, poverio sam mu našu tajnu“, rekao je princ Andrej. – Poznajem ga od detinjstva. Ovo je zlatno srce. „Preklinjem te, Natalie“, rekao je iznenada ozbiljno; – Otići ću, Bog zna šta može da se desi. Možeš proliti... Pa, znam da ne bih trebao pričati o tome. Jedna stvar - šta god da ti se desi kad me nema...
- Šta će biti?...
„Kakva god bila tuga“, nastavi princ Andrej, „molim vas, m lle Sophie, šta god da se desi, obratite se samo njemu za savet i pomoć. Ovo je najrasutnija i najsmješnija osoba, ali najzlatnije srce.
Ni otac i majka, ni Sonya, ni sam princ Andrej nisu mogli predvidjeti kako će rastanak sa njenim verenikom uticati na Natašu. Crvena i uzbuđena, suvih očiju, hodala je tog dana po kući, radeći najnebitnije stvari, kao da ne shvata šta je čeka. Nije plakala ni u onom trenutku kada joj je, opraštajući se, posljednji put poljubio ruku. - Ne idi! - samo mu je rekla glasom koji ga je naveo na razmišljanje da li zaista treba da ostane i kojeg je dugo pamtio nakon toga. Kada je otišao, ni ona nije plakala; ali je nekoliko dana sjedila u svojoj sobi bez plakanja, ništa nije zanimala i samo je ponekad govorila: „Ma, zašto je otišao!“

Antitijela: to su bjelančevine koje proizvode stanice limfoidnih organa (B limfociti) pod utjecajem antigena i mogu s njima stupiti u specifičnu vezu. U ovom slučaju, antitijela mogu neutralizirati toksine bakterija i virusa, nazivaju se antitoksini i antitijela koja neutraliziraju viruse.

Oni mogu precipitirati rastvorljive antigene - precipitine, i lepiti korpuskularne antigene - aglutinine.

Priroda antitela: antitela pripadaju gamaglobulinima. U tijelu gamaglobuline proizvode plazma ćelije i čine 30% svih proteina u krvnom serumu.

Gamaglobulini koji nose funkciju antitijela nazivaju se imunoglobulini i označeni su Ig. Ig proteini su hemijski klasifikovani kao glikoproteini, odnosno sastoje se od proteina, šećera i 17 aminokiselina.

Ig molekul:

Pod elektronskom mikroskopijom, molekul Ig ima oblik igre sa različitim uglom.

Strukturna jedinica Ig je monomer.

Monomer se sastoji od 4 polipeptidna lanca međusobno povezana disulfidnim vezama. Od 4 lanca, dva lanca su duga i zakrivljena u sredini. Molekularne težine od 50-70 kDa su takozvani teški H lanci, a dva kratka lanca su susjedni gornjim dijelovima H lanaca, molekulske težine 24 kDa su laki L lanci.

Varijabilni laki i teški lanci zajedno formiraju mjesto koje se specifično vezuje za antigen – Fab fragment centra za vezivanje antigena, Fc fragment odgovoran za aktivaciju komplementa.

Fab (engl. fragment antigen binding - antigen-binding fragment) i jedan Fc (engleski fragment crystallizable - fragment sposoban za kristalizaciju).

Klase imunoglobulina:

Ig M - čini 5-10% serumskih imunoglobulina. To je najveći molekul od svih pet klasa imunoglobulina. Molekularna težina 900 hiljada kDa. Prvi se pojavljuje u krvnom serumu kada se uvede antigen. Prisustvo Ig M ukazuje na akutni proces. Ig M aglutinira i lizira antigen, a također aktivira komplement. Vezani za krvotok.

Ig G - čini 70-80% serumskih imunoglobulina. Molekularna težina 160 hiljada kDa. Sintetiše se tokom sekundarnog imunološkog odgovora, u stanju je da savlada placentnu barijeru i pruži imunološku zaštitu novorođenčadi prva 3-4 mjeseca, a zatim se uništava. Na početku bolesti količina Ig G je neznatna, ali kako bolest napreduje, njihova količina raste. Ima veliku ulogu u zaštiti od infekcija. Visoki titri Ig G ukazuju na to da je tijelo u fazi oporavka ili da je nedavno pretrpjelo infekciju. Nalazi se u krvnom serumu i distribuira se kroz crijevnu sluznicu u tkivnu tekućinu.

Ig A - kreće se od 10-15%, molekulska težina 160 hiljada kDa. Ima važnu ulogu u zaštiti sluzokože respiratornog i probavnog trakta i genitourinarnog sistema. Postoje serumski i sekretorni Ig A. Serum neutralizira mikroorganizme i njihove toksine, ne vezuje komplement i ne prolazi kroz placentnu barijeru.

Sekretorni Ig A aktivira komplement i stimuliše fagocitnu aktivnost u sluzokožama, a nalazi se uglavnom u sekretima sluzokože, pljuvački, suznoj tečnosti, znoju, nosnom sekretu, gde obezbeđuje zaštitu površina koje komuniciraju sa spoljašnjom sredinom od mikroorganizama. Sintetiziraju ga plazma ćelije. U ljudskom serumu predstavljen je u monomernom obliku. Pruža lokalni imunitet.

Ig E - njegova količina u serumu je mala i samo mali dio plazma ćelija sintetizira Ig E. Nastaju kao odgovor na alergene i interakcija s njima izaziva HNT reakciju. Sintetiziraju ga B limfociti i plazma ćelije. Ne prolazi kroz placentnu barijeru.

Ig D - njegovo učešće nije dovoljno proučeno. Gotovo sav se nalazi na površini limfocita. Proizvode ga ćelije krajnika i adenoida. IgD se ne vezuje za komplement i ne prelazi placentnu barijeru. Ig D i Ig A su međusobno povezani i aktiviraju limfocite. Koncentracija Ig D raste tokom trudnoće, kod bronhijalne astme i kod sistemskog eritematoznog lupusa.

Normalna antitela (prirodna)

Tijelo ih sadrži određeni nivo, formiraju se bez pojava antigenske stimulacije. To uključuje antitijela protiv antigena eritrocita, krvnih grupa i protiv crijevnih grupa bakterija.

Proces proizvodnje antitijela, njihovo nakupljanje i nestanak ima određene karakteristike koje se razlikuju u primarnom imunološkom odgovoru (ovo je odgovor na početni susret s antigenom) i sekundarnom imunološkom odgovoru (ovo je odgovor na ponovljeni kontakt sa istim antigen nakon 2-4 sedmice).

Sinteza antitijela u bilo kojem imunološkom odgovoru odvija se u nekoliko faza - to su latentna faza, logaritamska faza, stacionarna faza i faza opadanja antitijela.

Primarni imuni odgovor:

Latentna faza: u ovom periodu dolazi do procesa prepoznavanja antigena i formiranja ćelija koje su sposobne da sintetišu antitela na njega. Trajanje ovog perioda je 3-5 dana.

Logaritamska faza: Stopa sinteze antitijela je niska. (trajanje 15-20 dana).

Stacionarna faza: titri sintetizovanih antitela dostižu maksimalne vrednosti. Prvo se sintetišu antitela koja pripadaju imunoglobulinima klase M, a zatim G. Kasnije se mogu pojaviti Ig A i Ig E.

Faza opadanja: Nivoi antitela se smanjuju. Trajanje od 1-6 mjeseci.

Sekundarni imuni odgovor.

Antitela (imunoglobulini, IG, Ig) su posebna klasa glikoproteina prisutnih na površini B ćelija u obliku receptora vezanih za membranu iu krvnom serumu i tkivnoj tečnosti u obliku rastvorljivih molekula. Oni su najvažniji faktor specifičnog humoralnog imuniteta. Imuni sistem koristi antitijela za identifikaciju i neutralizaciju stranih objekata – poput bakterija i virusa. Antitijela obavljaju dvije funkcije: antigen-vezivanje i efektor (oni izazivaju jedan ili drugi imunološki odgovor, na primjer, pokreću klasičnu shemu aktivacije komplementa).

Antitijela sintetiziraju plazma ćelije, koje postaju B limfociti kao odgovor na prisustvo antigena. Za svaki antigen formiraju se specijalizirane plazma stanice koje mu odgovaraju, koje proizvode antitijela specifična za ovaj antigen. Antitela prepoznaju antigene tako što se vezuju za specifični epitop - karakterističan fragment površinskog ili linearnog aminokiselinskog lanca antigena.

Antitijela se sastoje od dva laka lanca i dva teška lanca. Kod sisara postoji pet klasa antitijela (imunoglobulina) - IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, koja se razlikuju po strukturi i sastavu aminokiselina teških lanaca i po izvršenim efektorskim funkcijama.

Istorija studije

Prvo antitijelo su otkrili Behring i Kitazato u 1890, međutim, u ovom trenutku o prirodi onoga što je otkriveno tetanus antitoksin, osim svoje specifičnosti i prisutnosti u serum imune životinje, ništa se definitivno ne može reći. Samo sa 1937- istraživanje Tiseliusa i Kabata, počinje proučavanje molekularne prirode antitijela. Autori su koristili metodu elektroforeza proteina i pokazao povećanje frakcije gama globulina u krvnom serumu imuniziranih životinja. Adsorpcija serum antigen, koji je uzet za imunizaciju, smanjio je količinu proteina u ovoj frakciji na nivo intaktnih životinja.

Struktura antitijela

Opšti plan strukture imunoglobulina: 1) Fab; 2) Fc; 3) teški lanac; 4) laki lanac; 5) mesto vezivanja antigena; 6) šarnirski dio

Antitijela su relativno velika (~150 k Da- IgG) glikoproteini, sa složenom strukturom. Sastoje se od dva identična teški lanci(H-lanci, koji se sastoje od V H, C H1, šarke, C H2 i C H3 domena) i dva identična laki lanci(L-lanci koji se sastoje od V L i C L domena). Oligosaharidi su kovalentno vezani za teške lance. Koristeći proteazu papaina antitela se mogu podeliti na dva dela Fab (engleski vezivanje fragmenta antigena- antigen-vezujući fragment) i jedan Fc (engleski fragment koji se može kristalizovati- fragment sposoban za kristalizaciju). U zavisnosti od klase i funkcija koje se obavljaju, antitijela mogu postojati u oba monomerni obliku (IgG, IgD, IgE, serum IgA) i in oligomerni oblik (dimer-sekretorni IgA, pentamer - IgM). Ukupno postoji pet tipova teških lanaca (α-, γ-, δ-, ε- i μ-lanci) i dva tipa lakih lanaca (κ-lanac i λ-lanac).

Klasifikacija teških lanaca

Postoji pet razreda ( izotipovi) imunoglobulini, koji se razlikuju:

veličina

• sekvenca aminokiselina

IgG klasa je klasifikovana u četiri podklase (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), klasa IgA u dve podklase (IgA1, IgA2). Sve klase i podklase čine devet izotipova koji su normalno prisutni kod svih pojedinaca. Svaki izotip je određen sekvencom aminokiselina konstantne regije teškog lanca.

Funkcije antitijela

Imunoglobulini svih izotipova su bifunkcionalni. To znači da imunoglobulin bilo koje vrste

prepoznaje i vezuje antigen, a zatim

pojačava ubijanje i/ili uklanjanje imunih kompleksa nastalih kao rezultat aktivacije efektorskih mehanizama.

Jedan region molekula antitela (Fab) određuje njegovu specifičnost antigena, a drugi (Fc) obavlja efektorske funkcije: vezuje se za receptore koji se eksprimiraju na ćelijama tela (na primer, fagociti); vezivanje za prvu komponentu (C1q) sistema komplementa kako bi se pokrenuo klasični put kaskade komplementa.

IgG je glavni imunoglobulin serum zdrava osoba (čini 70-75% ukupne frakcije imunoglobulina), najaktivnija u sekundarnom imuni odgovor i antitoksični imunitet. Zahvaljujući svojoj maloj veličini ( koeficijent sedimentacije 7S, molekulske težine 146 kDa) je jedina frakcija imunoglobulina sposobna da se transportuje kroz placentnu barijeru i na taj način obezbedi imunitet fetusu i novorođenčetu. Sadrži IgG 2-3% ugljikohidrati; dva F ab fragmenta koji se vezuju za antigen i jedan F C fragment. F ab fragment (50-52 kDa) sastoji se od cijelog L-lanca i N-terminalne polovine H-lanca, međusobno povezanih disulfidna veza, dok F C fragment (48 kDa) formiraju C-terminalne polovice H lanaca. Postoji ukupno 12 domena u IgG molekulu (regije formirane od β-strukture I

α-heliksa su pentamer četvorolančane osnovne jedinice koja sadrži dva μ lanca. U ovom slučaju, svaki pentamer sadrži jednu kopiju polipeptida sa J-lancem (20 kDa), koji je sintetizovan od strane ćelije koja proizvodi antitela i kovalentno se vezuje između dva susedna F C fragmenta imunoglobulina. Pojavljuju se tokom primarnog imunološkog odgovora B-limfocita na nepoznati antigen i čine do 10% frakcije imunoglobulina. Oni su najveći imunoglobulini (970 kDa). Sadrži 10-12% ugljenih hidrata.

IgA Formiranje IgM se takođe dešava u pre-B-limfocitima, u kojima se oni primarno sintetiziraju iz μ-lanca; sinteza lakih lanaca u pre-B stanicama osigurava njihovo vezivanje za μ-lance, što rezultira stvaranjem funkcionalno aktivnih IgM, koji su integrirani u površinske strukture plazma membrane, djelujući kao receptor za prepoznavanje antigena; od ove tačke, ćelije pre-B limfocita postaju zrele i sposobne su da učestvuju u imunološkom odgovoru. IgA u serumu čini 15-20% ukupne frakcije imunoglobulina, sa 80% IgA molekula prisutnih u monomernom obliku kod ljudi. Sekretorni IgA je predstavljen u dimernom obliku u kompleksu sekretorna komponenta , sadržan u serozno-sluzokožnim sekretima (na primjer, u pljuvačke , suze,, kolostrum mlijeko

IgD, sekret sluzokože genitourinarnog i respiratornog sistema). Sadrži 10-12% ugljikohidrata, molekulske težine 500 kDa. čini manje od jednog procenta frakcije imunoglobulina plazme i nalazi se uglavnom na membrani nekih B limfocita. Funkcije koje nisu u potpunosti razjašnjene, vjerovatno receptor antigena sa visokim sadržajem ugljikohidrata vezanih za proteine ​​za B limfocite, još ne predstavljen antigenu

.

Molekularna težina 175 kDa. Klasifikacija prema antigenima tzv

"antitela koja su dokaz bolesti" čije prisustvo u organizmu signalizira upoznatost imunog sistema sa ovim patogenom u prošlosti ili trenutnu infekciju ovim patogenom, ali koji nemaju značajnu ulogu u borbi organizma protiv patogena (ne neutrališu ni samog patogena ili njegovih toksina, ali se vežu za manje proteine ​​patogena). autoagresivan antitela, ili autologno antitela, autoantitijela- antitijela koja uzrokuju uništenje ili oštećenje normalnih, zdravih tkiva tijelo.

domaćin i pokretanje razvojnog mehanizma autoimune bolesti alloreactive, ili antitela, ili- antitela protiv antigena tkiva ili ćelija drugih organizama iste biološke vrste. Aloantitijela igraju važnu ulogu u procesima odbacivanja alografta, na primjer, tokom transplantacije bubrezi, jetra, koštana srž i kod reakcija na transfuziju nekompatibilne krvi.

heterologan autoimune bolesti izoantitela- antitela protiv antigena tkiva ili ćelija organizama drugih bioloških vrsta. Izoantitijela su razlog nemogućnosti ksenotransplantacije čak i između evolucijski bliskih vrsta (npr. transplantacija jetre čimpanze čovjeku je nemoguća) ili vrsta koje imaju slične imunološke i antigenske karakteristike (transplantacija organa svinje čovjeku je nemoguća).

antiidiotipski antitijela - antitijela protiv antitijela koje proizvodi samo tijelo. Štaviše, ova antitela nisu „uopšteno“ protiv molekula datog antitela, već specifično protiv radnog, „prepoznajućeg“ regiona antitela, takozvanog idiotipa. Anti-idiotipska antitijela igraju važnu ulogu u vezivanju i neutralizaciji viška antitijela i u imunološkoj regulaciji proizvodnje antitijela. Osim toga, antiidiotipsko “antitijelo protiv antitijela” odražava prostornu konfiguraciju originalnog antigena protiv kojeg je originalno antitijelo proizvedeno. I tako antiidiotipsko antitijelo služi kao imunološki memorijski faktor za tijelo, analog originalnog antigena, koji ostaje u tijelu čak i nakon uništenja originalnih antigena. Zauzvrat, mogu se proizvesti antiidiotipska antitijela anti-anti-idiotipski

antitela itd.

Specifičnost antitela Znači da svi limfocita

sintetizira antitijela samo jedne specifične specifičnosti. A ova antitijela se nalaze na površini ovog limfocita kao receptori. antigen Kao što pokazuju eksperimenti, svi površinski imunoglobulini ćelija imaju isti idiotip: kada su rastvorljivi slično polimerizovanom flagellin

veže se za određenu ćeliju, tada se svi imunoglobulini ćelijske površine vezuju za ovaj antigen i imaju istu specifičnost, odnosno isti idiotip. Antigen se vezuje za receptore, a zatim selektivno aktivira ćeliju da proizvodi velike količine antitijela. I od tadaćelija sintetizira antitijela samo jedne specifičnosti, onda ovo specifičnost

Specifičnost interakcije antitela sa antigenima nije apsolutna, ona mogu u različitom stepenu da reaguju sa drugim antigenima. Antiserum primljen za jedan antigen može reagirati sa srodnim antigenom koji nosi jedan ili više identičnih ili sličnih odrednica. Stoga svako antitijelo može reagirati ne samo s antigenom koji je uzrokovao njegovo stvaranje, već i s drugim, ponekad potpuno nepovezanim molekulima. Specifičnost antitijela određena je aminokiselinskim slijedom njihovih varijabilnih regija.

Teorija klonske selekcije:

Antitijela i limfociti sa potrebnom specifičnošću već postoje u tijelu prije prvog kontakta sa antigenom.

Limfociti koji učestvuju u imunološkom odgovoru imaju receptore specifične za antigen na površini svoje membrane. U B limfociti

receptori su molekuli iste specifičnosti kao i antitijela, koja limfociti potom proizvode i luče.

Svaki limfocit na svojoj površini nosi receptore samo jedne specifičnosti. antigen Limfociti imaju , prolaze kroz fazu proliferacija i formiraju veliki klon plazma ćelija. Plazma ćelije sintetiziraju antitijela samo one specifičnosti za koju je prekursorski limfocit programiran. Signali za proliferaciju su citokini

koje luče druge ćelije.

Limfociti mogu sami lučiti citokine.

Izotipski Varijabilnost antitijela

Alotipski Antitijela su izuzetno varijabilna (u tijelu jedne osobe može postojati do 10 8 varijanti antitijela). Sva raznolikost antitijela proizlazi iz varijabilnosti i teških i lakih lanaca. Razlikuju se antitijela koja proizvodi jedan ili drugi organizam kao odgovor na određene antigene:

Idiotipski varijabilnost - manifestuje se u prisustvu klasa antitela (izotipova), koji se razlikuju po strukturi teških lanaca i oligomernosti, koje proizvode svi organizmi date vrste;

varijabilnost - manifestuje se na individualnom nivou unutar date vrste u obliku varijabilnosti alela imunoglobulina - genetski je određena razlika između datog organizma i drugog;

varijabilnost - manifestuje se u razlikama u sastavu aminokiselina na mestu vezivanja antigena. Ovo se odnosi na varijabilne i hipervarijabilne domene teških i lakih lanaca koji su u direktnom kontaktu sa antigenom.. Ova vrsta negativne povratne sprege javlja se tokom formiranja antitijela. Efekat antitela se ne može objasniti jednostavno neutralizacijom antigena, jer celi IgG molekuli suzbijaju sintezu antitela mnogo efikasnije od F(ab")2 fragmenata. Pretpostavlja se da blokada produktivne faze T-zavisnih B- ćelijski odgovor nastaje kao rezultat stvaranja poprečnih veza između antigena, IgG i Fc receptora na površini B ćelija. Injekcija IgM, pojačava imuni odgovor. Budući da se antitijela ovog specifičnog izotipa pojavljuju prva nakon uvođenja antigena, njima se pripisuje pojačavajuća uloga u ranoj fazi imunološkog odgovora.

1. Opsonizacija (imuna fagocitoza).

2. Antitoksični efekat.

3. Aktivacija komplementa.

4. Neutralizacija.

5. Cirkulirajući kompleksi (vezani rastvorljivi Ag formiraju komplekse sa Abs, koji se izlučuju iz organizma žučom i urinom).

6. Citotoksičnost zavisna od antitijela.

Dinamika stvaranja antitijela.

Serološke reakcije u laboratorijskoj dijagnostici zaraznih bolesti.

U zaštiti organizma od stranih antigena odlučujuću ulogu imaju imunološki mehanizmi koje provode antitijela i imunokompetentne stanice. Osnova imunoloških mehanizama je specifična reakcija između antitijela ili limfocita (nastalih pod utjecajem antigena koji je ušao u tijelo) i antigena. Glavna funkcija antitijela je vezanje antigena i njegovo dalje uklanjanje iz tijela.

Međutim, takve reakcije između antitijela i antigena mogu se dogoditi i izvan tijela (in vitro) u prisustvu elektrolita i moguće su samo ako postoji komplementarnost (strukturna sličnost, afinitet) antigena i antitijela.

Imajući specifična antitijela na određeni antigen, možemo ga prepoznati i identificirati među drugim antigenima, a u krvnom serumu postoje antitijela protiv poznatog antigena.

Reakcija antigen-antitijelo in vitro je praćena pojavom određene pojave - aglutinacije, precipitacije, lize.

Dakle sve serološke reakcije koriste se u dvije svrhe:

otkrivanje antitijela u pacijentovom serumu pomoću standardnih dijagnostičkih antigena ( za serološku dijagnostiku zaraznih bolesti);

identificirati nepoznate antigene koristeći poznate standardne serume koji sadrže antitijela određene specifičnosti ( za serološku identifikaciju patogena).

Na primjer, ako pacijentov serum reagira sa specifičnim mikrobnim antigenom, to znači da pacijentov serum sadrži antitijela protiv ovog mikroorganizma.

Serološka dijagnoza– uzeti standardni antigen (diagnosticum), koji je inaktiviran ili žive bakterije, virusi ili njihovi antigeni (komponente) u izotoničnoj otopini.

Serološka identifikacija– koristiti standardne imunološke serume, koji se dobijaju od imuniziranih životinja (veliki broj antitijela se pojavljuje u krvi životinja kao rezultat ponovljene imunizacije patogenom).

Aglutinacija.

Aglutinacija– serološka reakcija između antitijela (aglutinina) i antigena (aglutinogena) koji se nalaze na površini bakterijske stanice, što rezultira stvaranjem kompleksa antigen-antitijelo (aglutinat).

Mehanizam aglutinacije– pod utjecajem iona elektrolita, negativni površinski naboj bakterijske stanice se smanjuje i stoga se one mogu približiti na toliku udaljenost da se bakterije lijepe.

Makro- i mikroskopski prikaz aglutinata:

O-aglutinacija (somatska) – sitnozrnasta, pod mikroskopom – bakterije se spajaju na polovima ćelija, formirajući mrežu.

Vi-aglutinacija (kapsularna) – fino zrnaste pod mikroskopom, bakterije se lijepe po cijeloj površini ćelije.

H-aglutinacija (flagelarna) - aglutinini mikroskopski imobiliziraju bakterije - veliki pamuk, lijepljenje bakterijskih stanica u području flagela.

Reakcija aglutinacije se koristi za određivanje antitijela u krvnom serumu pacijenata, na primjer, kod bruceloze (reakcija Wright, Heddelson), trbušnog tifusa i paratifusa (Vidalova reakcija) i drugih zaraznih bolesti, kao i za određivanje patogena izolovanog iz pacijent. Ista reakcija se koristi za određivanje krvnih grupa pomoću monoklonskih antitijela protiv aloantigena crvenih krvnih zrnaca.

Koriste se različite varijante reakcije aglutinacije: ekstenzivna, indikativna, indirektna itd.

Da bi odredili pacijentova antitijela, stavljaju opsežna reakcija aglutinacije: suspenzija ubijenih mikroba (diagnosticum) dodaje se u razrjeđenja krvnog seruma pacijenta a nakon nekoliko sati inkubacije na 37°C, bilježi se najveće razrjeđenje (titar) seruma pri kojem je došlo do aglutinacije, tj. formiran talog.

Priroda i brzina aglutinacije ovise o vrsti antigena i antitijela.

Ako je potrebno utvrditi patogen izolovan od pacijenta, staviti indikativna reakcija aglutinacije, korištenjem dijagnostičkih antitijela, tj. izvršiti serotipizaciju patogena. Indikativna reakcija se izvodi na stakalcu. Čista kultura patogena izolovanog od pacijenta dodaje se u 1 kap dijagnostičkog imunološkog seruma u razrjeđenju 1:10 ili 1:20. Ako se pojavi flokulantni precipitat, tada se reakcija provodi u epruvetama uz povećanje razrjeđenja dijagnostičkog seruma u svaku dozu seruma. Reakcija se smatra pozitivnom ako se primijeti aglutinacija u razrjeđenju bliskom titru dijagnostičkog seruma. U kontrolama (serum razrijeđen izotoničnim rastvorom natrijum hlorida ili suspenzija mikroba u istom rastvoru) ne bi trebalo da bude taloga u obliku pahuljica.

Različite srodne bakterije mogu biti aglutinirane istim dijagnostičkim aglutinirajućim serumom, što otežava njihovu identifikaciju. Stoga koriste adsorbirane aglutinirajuće serume, iz kojih su ukrštena antitijela uklonjena adsorpcijom na srodne bakterije. Takvi serumi zadržavaju antitijela koja su specifična samo za datu bakteriju. Proizvodnju monoreceptorskih dijagnostičkih aglutinirajućih seruma na ovaj način predložio je A. Castellani (1902). Indirektna (pasivna) reakcija hemaglutinacije(RNGA) temelji se na upotrebi eritrocita (ili lateksa) s antigenima ili antitijelima adsorbiranim na njihovoj površini, čija interakcija s odgovarajućim antitijelima ili antigenima krvnog seruma pacijenata uzrokuje da se eritrociti zalijepe zajedno i ispadnu na dno epruveta ili ćelija u obliku zupčastog sedimenta. RNGA se koristi za dijagnostiku infektivnih bolesti, određivanje gonadotropnog hormona u urinu pri utvrđivanju trudnoće, za utvrđivanje preosjetljivosti na lijekove i hormone iu nekim drugim slučajevima. Reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA) zasniva se na blokadi, supresiji virusa antitijelima imunološkog seruma, uslijed čega virusi gube sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica. RTGA se koristi za dijagnostiku mnogih virusnih bolesti čiji uzročnici (virusi gripe, ospice, rubeola, krpeljni encefalitis itd.) mogu aglutinirati crvena krvna zrnca raznih životinja. Reakcija aglutinacije za određivanje krvnih grupa koristi se za uspostavljanje ABO sistema pomoću RA eritrocita, koristeći antitela na krvne grupe A (II), B (III). Kontrola je serum koji ne sadrži antitijela, tj. AB(IV) krvne grupe, antigeni sadržani u eritrocitima grupa A(II), B(III); negativna kontrola ne sadrži antigene, tj. Koriste se crvena krvna zrnca grupe 0 (I). IN reakcije aglutinacije za određivanje Rh faktora

koristite anti-Rhesus serume (najmanje dvije različite serije). Ako na membrani ispitivanih eritrocita postoji Rh antigen, dolazi do aglutinacije ovih stanica. Standardni Rh-pozitivni i Rh-negativni eritrociti svih krvnih grupa služe kao kontrola. Reakcija aglutinacije za određivanje anti-Rhesus antitijela

(indirektna Coombsova reakcija) se koristi kod pacijenata sa intravaskularnom hemolizom. Neki od ovih pacijenata imaju anti-Rhesus antitijela koja su nekompletna. Oni specifično stupaju u interakciju s Rh-pozitivnim eritrocitima, ali ne uzrokuju njihovu aglutinaciju. Prisustvo takvih nekompletnih antitijela utvrđuje se indirektnim Coombsovim testom. Da bi se to postiglo, antiglobulinski serum (antitijela protiv humanih imunoglobulina) dodaje se u sistem anti-Rh antitijela + Rh-pozitivni eritrociti, što uzrokuje aglutinaciju eritrocita. Koristeći Coombsovu reakciju dijagnosticiraju se patološka stanja povezana s intravaskularnom lizom eritrocita imunog porijekla, na primjer, hemolitička bolest novorođenčeta: eritrociti Rh-pozitivnog fetusa kombinuju se s nekompletnim antitijelima na Rh faktor koji cirkuliraju u krvi, a koji imaju prošla kroz placentu od Rh negativne majke. Reakcija koaglutinacije - tip RA: ćelije patogena se određuju pomoću stafilokoka prethodno tretiranih imunološkim dijagnostičkim serumom. Stafilokoki koji sadrže proteine A,